Los productos aceleran la fijación y la permeabilización y mejoran la detección de señales

Indianápolis (7 de agosto de 2013) - Los nuevos e innovadores kits de reactivos para tinción intracelular PerFix-Expose1 y PerFix-nc1 de Beckman Coulter Life Sciences minimizan la manipulación de las muestras para lograr un flujo de trabajo optimizado con resultados de alta calidad. Desarrollados para su uso en los citómetros de flujo Gallios1 y Navios2 de Beckman Coulter y compatibles con todos los fluorocromos de Beckman Coulter Life Sciences, los kits permiten un enfoque claro en los compartimentos citoplasmáticos y nucleares de la célula.

PerFix-Expose (kit de exposición fosfo-epítopo), que ayuda a los científicos a identificar y explorar vías de señalización intracelulares complejas interrumpidas por el cáncer y otras enfermedades, permite que los anticuerpos acoplados al fluorocromo y otras sondas entren en las células, sus núcleos y otros compartimentos celulares, donde se unen a las proteínas relevantes para señalizar las vías que han sido interrumpidas por la enfermedad.

La fijación celular se realiza utilizando un agente reticulador, mientras que la permeabilización de los glóbulos blancos y la lisis de los glóbulos rojos se logra utilizando un detergente. Un agente desnaturalizante “desenmascara” las proteínas unidas a otras proteínas o ADN.

Los investigadores de Beckman Coulter desarrollaron el kit para su uso con sangre completa, médula ósea u otros fluidos que contengan sangre. Las muestras se fijan en pequeños tubos de ensayo o microplacas de pocillos profundos y se mezcla el reactivo con las células. El kit puede utilizarse para estudiar diversos antígenos intracelulares e intranucleares.

Con PerFix-nc (sin centrifugación), los investigadores pueden realizar una tinción de superficie e intracelular concomitante para la citometría de flujo, con el fin de aprovechar un nuevo enfoque que proporcione el acceso al interior de los leucocitos humanos. El análisis de múltiples epítopos intracelulares, o de múltiples marcadores intracelulares junto con marcadores de superficie celular, se consigue mediante fijación, permeabilización y tinción directa de leucocitos de sangre completa periférica junto con la lisis de eritrocitos.

La preparación se realiza a temperatura ambiente, sin necesidad de pasos de lavado o centrifugación, y puede realizarse manualmente o automatizarse en estaciones de trabajo como la plataforma Biomek de Beckman Coulter Life Sciences. PerFix-nc es lo suficientemente flexible como para permitir el lavado, si se desea, y/o el uso de un nivel de concentración fijador superior, y hace que la tinción intracelular sea tan sencilla y eficiente como la tinción superficial.

La calidad del kit PerFix-nc se caracteriza por las intensidades medias de fluorescencia y el rendimiento uniforme en estudios de repetibilidad, como lo demuestran los niveles de recuperación celular. El kit ofrece un método de permeabilización de leucocitos original y potente seguido de un paso de fijación optimizado en un proceso que implica solo 15 minutos de tiempo de trabajo del usuario.

“Más y más, los investigadores de citometría de flujo están centrando sus estudios en el interior de las células”, comentó Mario Koksch, vicepresidente y director general de la unidad de negocios de citometría de Beckman Coulter Life Sciences. “Con PerFix-nc, los usuarios pueden realizar un seguimiento de los marcadores intracelulares de manera fácil, rápida y precisa, y combinarlos con el etiquetado y el análisis de la superficie celular. PerFix-Expose ayuda a los científicos a identificar y explorar vías de señalización intracelulares complejas interrumpidas por el cáncer y otras enfermedades, lo cual es esencial para comprender y desarrollar tratamientos”.