Protocolo de tinción del colorante de viabilidad fijable ViaKrome

Materiales

  • PBS
  • Suero fetal bovino
  • Reactivos PerFix-nc 1, 2 y 3 (número de pieza B10825)
  • PBS con formaldehído al 0,5 %

Líneas celulares

  1. Utilice líneas celulares a 5 x 106 células por ml, 100 μl por prueba (5 x 105 células por prueba)
  2. Añada 2,5 μl* de colorante de viabilidad fijable ViaKrome
  3. Vortex
  4. Incube la mezcla a 18-25 °C durante 20 minutos protegiéndola de la luz
  5. Añada 3 ml de PBS 1X
  6. Centrifugue durante 5 minutos a 300 × g
  7. Aspire el sobrenadante
  8. Añada 500 μl de PBS 1X/formaldehído al 0,5 %
  9. Adquiera los datos utilizando un citómetro de flujo

*Para el uso con otros protocolos y/o muestras, se recomienda una titulación del colorante de viabilidad fijable ViaKrome para establecer la dosis óptima.

Tinción de líneas celulares típicas con los colorantes de viabilidad fijable ViaKrome

Tinción representativa utilizando colorantes de viabilidad fijable ViaKrome. Representación biparamétrica (dispersión lateral frente a intensidad de fluorescencia) de la tinción de una mezcla de células no tratadas (células vivas) y de células Jurkat tratadas térmicamente (células muertas). La adquisición se realizó con un citómetro de flujo CytoFLEX LX N-V-B-Y-R-I y la emisión se detectó mediante el filtro de paso de banda indicado. El colorante ViaKrome 405 se excitó con el láser violeta (405 nm), panel A, el colorante ViaKrome 561 se excitó con el láser verde amarillo (561 nm), panel B, el colorante ViaKrome 638 se excitó con el láser rojo (638 nm), panel C y el colorante ViaKrome 808 se excitó con el láser infrarrojo (808 nm), panel D.

Células mononucleares de sangre periférica (CMSP)

  1. Añada 2,5 μl de colorante de viabilidad fijable ViaKrome en 50 μl de PBMC a 10 x 106 células/ml
  2. Vortex
  3. Incube la mezcla a 18-25 °C durante 20 minutos protegiéndola de la luz
  4. Añada 3 ml de PBS 1X
  5. Centrifugue a 150 × g durante 5 minutos. Retire el sobrenadante mediante aspiración
  6. Añada 50 μl de suero fetal bovino. Agite en remolino hasta que el sedimento se disocie.
  7. Proceda con la tinción intracelular

*Para el uso con otros protocolos y/o muestras, se recomienda una titulación del colorante de viabilidad fijable ViaKrome para establecer la dosis óptima.

Tinción típica de CMSP con colorantes de viabilidad fijable ViaKrome

Tinción representativa utilizando colorantes de viabilidad fijable ViaKrome. Representación biparamétrica (dispersión lateral frente a intensidad de fluorescencia) de la tinción de células mononucleares de sangre periférica (CMSP). La adquisición se realizó con un citómetro de flujo CytoFLEX LX N-V-B-Y-R-I y la emisión se detectó mediante el filtro de paso de banda indicado. El colorante ViaKrome 405 se excitó con el láser violeta (405 nm), panel A, el colorante ViaKrome 561 se excitó con el láser verde amarillo (561 nm), panel B, el colorante ViaKrome 638 se excitó con el láser rojo (638 nm), panel C y el colorante ViaKrome 808 se excitó con el láser infrarrojo (808 nm), panel D.

 

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