Aislamiento de la sangre (ARN)

Vista general del proceso

• Produce ácido nucleico de alta calidad
• Compatible con técnicas de análisis de expresión génica posteriores, tales como qRT-PCR y micromatriz.
• Apto para el procesamiento automatizado en la estación de trabajo de automatización de laboratorio Biomek FXP/NXP Span-8 de Beckman Coulter
• No se necesita filtración al vacío o extracción orgánica.

Aplicación: Extracción de ARN total de la sangre

Técnicas de aplicación posteriores: Expresión génica a través de qRT-PCR y análisis de micromatriz

Descripción general del proceso

1. Solución amortiguadora de lisis agregada a la sangre y mezclada 2. Lisis y digestión de proteinasa K 3. Adición de solución amortiguadora de unión 1
4. Separación magnética de las esferas del sobrenadante, lavado con solución amortiguadora de lavado y etanol 5. Reacción DNasa I
6. Nuevo enlace con la solución amortiguadora de unión 2 7. Separación magnética de las esferas del sobrenadante, lavado con solución amortiguadora de lavado y etanol 8. Elución

Rendimiento y calidad superiores

En el estudio a continuación (Figura 1), Agencourt RNAdvance Blood produjo aproximadamente 700 ng de ARN por cada 400 µl de sangre PAXgene, lo que equivale a casi 17 µg de ARN por cada tubo de sangre conservada con PAXgene. Al utilizar el proceso basado en las esferas paramagnéticas SPRI, Agencourt RNAdvance Blood recuperó por encima de un 30 % más de ARN que el kit de ARN PAXgene Blood, a la vez que demostró un pureza constante

Figura 1. Rendimiento de ARN promedio (en µg/ml) de 24.400 µl de muestras de sangre conservadas con PAXgene extraídas con el kit Agencourt RNAdvance Blood y 9,4 ml de sangre conservada con PAXgene extraída con el kit de ARN PAXgene Blood. Las relaciones promedio de 260/280 en las 24 extracciones realizadas con Agencourt RNAdvance Blood fueron de 1,8 con una desviación estándar de 0,13 y %CV de 7,24. El volumen de elución para la extracción de Agencourt RNAdvance Blood fue de 20 µl.