Aislamiento de la sangre (ARN)
El sistema Agencourt RNAdvance Blood, desarrollado con tecnología basada en esferas paramagnéticas de inmovilización reversible de fase sólida (Solid Phase Reversible Immobilization, SPRI) es un proceso de aislamiento de ácido ribonucleico (ARN). Permite a la comunidad de las ciencias biológicas purificar ARN de alta calidad a partir de sangre recolectada usando tubos PAXgene*. El kit cuenta con un formato para procesar una placa de 96 pocillos en alrededor de 3,5 horas.
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RNAdvance Blood Workflow Steps
Caracteristicas
Vista general del proceso
- Produce ácido nucleico de alta calidad
- Compatible con técnicas de análisis de expresión génica posteriores, tales como qRT-PCR y micromatriz.
- Apto para el procesamiento automatizado en la estación de trabajo de automatización de laboratorio Biomek FXP/NXP Span-8 de Beckman Coulter
- No se necesita filtración al vacío o extracción orgánica.
Aplicación: Extracción de ARN total de la sangre
Técnicas de aplicación posteriores: Expresión génica a través de qRT-PCR y análisis de micromatriz
Descripción general del proceso
1. Solución amortiguadora de lisis agregada a la sangre y mezclada 2. Lisis y digestión de proteinasa K 3. Adición de solución amortiguadora de unión 1
4. Separación magnética de las esferas del sobrenadante, lavado con solución amortiguadora de lavado y etanol 5. Reacción DNasa I
6. Nuevo enlace con la solución amortiguadora de unión 2 7. Separación magnética de las esferas del sobrenadante, lavado con solución amortiguadora de lavado y etanol 8. Elución
Rendimiento y calidad superiores
En el estudio a continuación (Figura 1), Agencourt RNAdvance Blood produjo aproximadamente 700 ng de ARN por cada 400 µl de sangre PAXgene, lo que equivale a casi 17 µg de ARN por cada tubo de sangre conservada con PAXgene. Al utilizar el proceso basado en las esferas paramagnéticas SPRI, Agencourt RNAdvance Blood recuperó por encima de un 30 % más de ARN que el kit de ARN PAXgene Blood, a la vez que demostró un pureza constante
Figura 1. Rendimiento de ARN promedio (en µg/ml) de 24.400 µl de muestras de sangre conservadas con PAXgene extraídas con el kit Agencourt RNAdvance Blood y 9,4 ml de sangre conservada con PAXgene extraída con el kit de ARN PAXgene Blood. Las relaciones promedio de 260/280 en las 24 extracciones realizadas con Agencourt RNAdvance Blood fueron de 1,8 con una desviación estándar de 0,13 y %CV de 7,24. El volumen de elución para la extracción de Agencourt RNAdvance Blood fue de 20 µl.
Combining RNAdvance Blood chemistry with our Biomek Workstation offers a high throughput and minimal hand-on solution.
Product Specifications
| Application Uses | RNA Isolation, RNA Extraction, Nucleic acid sample prep, RNA Sequencing |
| Format | Liquid |
| Starting Sample Material | Blood |
| Automated Available | Yes |
| Item Specifications Referenced | A35604 |
Citations
Beineke, P., Fitch, K., Tao, H., Elashoff, M. R., Rosenberg, S., Kraus, W. E., . . . PREDICT Investigators. (2012, December 3). A whole blood gene expression-based signature for smoking status. BMC Medical Genomics, 5(58). doi:10.1186/1755-8794-5-58
- Used to extract RNA from PAXgene-collected blood samples
Allaire, N. E., Bushnell, S. E., Bienkowska, J., Brock, G., & Carulli, J. (2013, January 5). Optimization of a high-throughput whole blood expression profiling methodology and its application to assess the pharmacodynamics of interferon (IFN) beta-1a or polyethylene glycol-conjugated IFN beta-1a in healthy clinical trial subjects. BMC Research Notes, 6(8). doi:10.1186/1756-0500-6-8
- Used to extract RNA from PAXgene-collected blood samples
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