Los protocolos para aislar los exosomas a menudo incluyen la ultracentrifugación diferencial con un gradiente de densidad. ¿Qué ventajas ofrece este método?

FAQs об исследованиях

La ultracentrifugación diferencial se ha considerado durante mucho tiempo el "estándar de referencia" para aislar exosomas porque puede proporcionar de forma fiable exosomas puros para su estudio.1,2 Una variación de este método, que utiliza un medio amortiguador de 30 % de sacarosa, elimina aún más contaminantes, como las proteínas no asociadas a exosomas o grandes agregados de proteínas, que sedimentan por centrifugación pero no flotan en un gradiente de sacarosa. Más recientemente, la centrifugación de gradiente de densidad con iodixanol ha superado la ultracentrifugación estándar de CCM en términos de pureza para la elaboración de perfiles de ómicos posteriores.3,4 Los gradientes de densidad permiten una separación eficaz de las vesículas de acuerdo con su densidad5, proporcionando así una población “más limpia” de exosomas.2



[1] Théry C, Amigorena S, Clayton A and Raposo G. Isolation and characterization of exosomes from cell culture supernatants and biological fluids. Curr Protoc Cell Biol. Chapter 3; Unit 3.22: (2006).

[2] Momen-Heravi F, Balaj L, et al. Current methods for the isolation of extracellular vesicles. Biol Chem. 394;1253-62: (2013). doi: 10.1515/hsz-2013-0141.

[3] Van Deun J, Mestdagh P, Sormunen R, et al. The impact of disparate isolation methods for extracellular vesicles on downstream RNA profiling. J Extracell Vesicles. 3; 24858: (2014). doi: org/10.3402/jev.v3.24858.

[4] Lobb RJ, Becker M, Wen SW, et al. Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma. J Extracell Vesicles. 4; 27031: (2015). doi: org/10.3402/jev.v4.27031.

[5] Witwer KW, Buzás EI, Bemis LT, et al. Standardization of sample collection, isolation and analysis methods in extracellular vesicle research. J Extracell Vesicles. 2; 20360: (2013). doi: org/10.3402/jev.v2i0.20360.