Rendimiento del kit de ciclo celular

Para aumentar la confianza en el análisis de contenido de ADN, se debe monitorizar la cantidad de variación medida (coeficiente de variación) en el pico G0/G1. Los valores inferiores al 3 % se consideran óptimos y los valores superiores al 6 % en células no tumorales son inaceptables (Darzynkiewicz et al.). Se introduce un error en la técnica, durante la preparación de la célula y los pasos de tinción, así como en la adquisición en el citómetro de flujo. Una fuente de error se atribuye a un acceso inconsistente del reactivo de tinción al ADN nuclear. Uso de una fijación derivada del formaldehído en un protocolo de tinción sin lavado que proporciona una tinción robusta compatible con el análisis automatizado común a través de los algoritmos de determinación del ciclo celular. Debido al solapamiento entre G1 y la fase S temprana y el solapamiento de G2/M y de la fase S tardía, el análisis manual de los datos del ciclo celular sigue siendo tedioso y sujeto a variabilidad. Varios paquetes de software de citometría de flujo incluyen algoritmos para ayudar a los usuarios a modelar los datos del ciclo celular. Los datos presentados a continuación se analizaron utilizando el algoritmo de JV Watson, uno de los dos algoritmos incluidos en Kaluza Analysis versión 2.0.

Análisis univariante de la línea celular Jurkat.(A) Datos representativos obtenidos con el kit de ciclo celular. (B) Tabla que resume los datos obtenidos con una muestra teñida múltiples veces (n = 10). El análisis del ciclo celular univariante utilizando el contenido de ADN demostró que el flujo de trabajo de fijación optimizado asociado al kit de ciclo celular permite (i) una buena recuperación de los eventos singletes (alrededor del 70 %), (ii) buena resolución de los datos con un CV (pico G0/G1) >3 % y (iii) buena reproducibilidad con un CV % <5 % para las células de interés.

Pozarowski and Z. Darzynkiewicz. "Analysis of Cell Cycle by Flow Cytometry," Methods Mol Biol 281(2): 301-311, 2004.

*Solo para uso en investigación.  No se debe utilizar en procedimientos con fines diagnósticos.