Todos los colorantes de viabilidad fijable disponibles se basan en grupos funcionales activados por éster NHS que se entrelazan con aminas primarias en las proteínas.  La hidrólisis compite con la reacción de entrelazado, que reduce la eficiencia de la reacción de etiquetado.  Esta reacción de hidrólisis es dependiente del pH y de la temperatura.  La semivida del grupo reactivo puede ser de tan solo 10 minutos a un pH de 8,6 a 4 °C.  Esto significa que, en soluciones acuosas, el colorante se vuelve inerte durante un breve periodo de tiempo, reduciendo la tinción.

Además, el vapor de agua en la solución concentrada puede comprometer el rendimiento del reactivo, reduciendo la tinción.  Al reducirse la tinción, parece que hay más células vivas, cuando en realidad están muertas. Por este motivo, los reactivos se reconstituyen normalmente en DMSO, se almacenan a -80 °C y se dividen proporcionalmente en volúmenes pequeños para un solo uso.  Los procedimientos de tinción deben cronometrarse cuidadosamente para obtener resultados coherentes.

Los colorantes de viabilidad fijable ViaKrome no utilizan grupos reactivos de éster NHS.  Las sustancias químicas no están sujetas a hidrólisis, lo que da lugar a un rendimiento más robusto en los procedimientos de ensayo estándar.

Resultados del ensayo 2 y 24 horas después de la tinción. Se tiñó una mezcla de células Jurkat y de células Jurkat estresadas por calor (55 °C durante 10 minutos) con el colorante de viabilidad fijable ViaKrome indicado.  Las muestras se adquirieron de inmediato y 2 horas (n = 4) o 24 horas (n = 3) después de la tinción.  El gráfico representa la población de células muertas como porcentaje del tiempo cero.  Las barras de error representan la variación promedio entre réplicas.  El reclutamiento a las 2 horas es del 98-100 % del tiempo 0 y el reclutamiento a las 24 horas es del 91-103 % del tiempo 0.