Método para determinar el ajuste del parámetro de tipo de célula para que concuerde con el Vi CELL XR heredado

Con la introducción del nuevo Vi-CELL BLU, ahora es posible utilizar el modo de placa para realizar diseños experimentales más complejos.

Uno de los usos de esta capacidad puede ser ayudar a emparejar los tipos de células del Vi-CELL BLU para obtener recuentos celulares y niveles de viabilidad equivalentes a los obtenidos en los instrumentos Vi-CELL XR existentes

Los tipos de células predeterminados en el Vi-CELL BLU coincidirán relativamente cerca con las líneas celulares más generales, pero las líneas celulares específicas y los tipos de células más exóticos podrían requerir algún refinamiento para conseguir un buen acuerdo entre los instrumentos.

El método descrito a continuación aprovecha el enfoque factorial directo. No es necesario utilizar estadísticas extensas a menos que se desee, pero puede proporcionar rápidamente una indicación direccional de los parámetros que tienen mayor impacto en los valores deseados y la dirección en que se deben ajustar.

diseño experimental

Se definieron ocho tipos de células utilizando el tipo de célula mamífera predeterminado como punto de partida. Los valores se muestran en la tabla siguiente.

 Tipo de célula  MT01  MT02  MT03  MT04  MT05  MT06  MT07  MT08
 Diámetro mínimo (µm)  6  6  6  6  6  6  6  6
 Diámetro máximo (µm)  20  40  20  40  20  40  20  40
 Imágenes  100  100   100  100  100  100  100  100
 Nitidez de la célula  7  7  7  7  7  7  7  7
 Circularidad mínima  0,1  0,1  0,1  0,1  0,1  0,1  0,1  0,1
 Grado de desagrupación  Alto  Alto  Alto  Alto  bajo  bajo  bajo  bajo
 Ciclos de aspiración  3  3  3  3  3  3  3  3
 Brillo del punto viable (%)  40  40  90  90  40  40  90  90 
 Área del punto viable (%)  5  5  5  5  5  5  5  5
 Ciclos de mezclado  3  3  3  3  3  3  3  3

En este caso concreto, estamos ajustando 3 parámetros clave: diámetro máximo, brillo del punto viable y grado de desagrupación Para cada parámetro se elige un valor alto y un valor bajo para establecer un intervalo extremo para cada parámetro. Esto proporciona 8 posibles combinaciones, lo cual es ideal para una disposición de placa de 96 pocillos, ya que esto proporcionará una fila de 12 muestras por tipo de célula.

Luego se cargó una placa de 96 pocillos con células CHO, 6 x 106 células/ml. La placa se configuró asignando cada tipo de célula a una fila completa de la placa. Para compensar cualquier problema de tiempo de ejecución, la placa se analizó en modo Columna para que cada tipo de célula se procese una después de la otra. Este diseño se ejecutó por triplicado en 3 instrumentos Vi–CELL BLU diferentes.

Diseño de placa para análisis de tipo de célula

Figura 1. Diseño de placa para análisis de tipo de célula

Resultados

Los resultados del procesamiento se importaron en MS Excel y luego se utilizó una tabla dinámica para extraer los datos. Los resultados se representaron como gráficos simples de alto-bajo para determinar los efectos de los diferentes ajustes de tipo de célula en los valores de concentración, viabilidad y diámetro promedio.

Gráficos alto-bajo de los parámetros de tipo de célula ajustados

Figura 2. Gráficos alto-bajo de los parámetros de tipo de célula ajustados

Los resultados muestran que el diámetro máximo y el grado de desagrupación tienen efectos significativos en la concentración celular, mientras que tienen un efecto pequeño en el porcentaje de viabilidad. El brillo del punto viable tiene el impacto más significativo en los valores de viabilidad, como era de esperar.

Los gráficos anteriores pueden ayudar a establecer nuestras expectativas de lo que sucederá cuando ajustemos estos parámetros particulares.

Sin embargo, si nuestro objetivo es hacer coincider los valores del Vi–CELL XR, este enfoque puede ayudar enormemente si también procesamos, al mismo tiempo, las mismas muestras descritas anteriormente en el Vi–CELL XR a medida que se recopilan los datos anteriores. Luego, podemos obtener datos de comparación en las mismas muestras de células. Esto se realizó en un experimento procesando 10 muestras en 3 Vi-CELL XR diferentes con el tipo de célula CHO predeterminado para el análisis.

Los resultados siguientes muestran los diferentes resultados de tipo de célula de las máquinas Vi–CELL BLU (columnas) superpuestos con los resultados promedio de los instrumentos Vi–CELL XR (filas).

Efecto del tipo de célula en las concentraciones de células CHO

Efecto del tipo de célula en la viabilidad de las CHO

Efecto de tipo de célula en el diámetro de célula de las CHO
Figura 3. Comparación entre el Vi–CELL BLU y el Vi–CELL XR usando diferentes ajustes de tipo de célula

Los gráficos anteriores muestran los mejores coincidencias:

Concentración de células: Los tipos de células MT02 y MT04 son las coincidencias más cercanas, siendo MT02 levemente mejor.

Viabilidad celular: MT01, MT02, MT05 y MT06 coinciden muy bien.

Diámetro medio: Ttodos los tipos de células excepto MT06 y MT08 coinciden bastante bien con MT01 y MT03, abarcando muy bien el intervalo del Vi–CELL XR.

Sin embargo, sobre la base de los ajustes anteriores, parecería que el tipo de célula MT02 ofrece una coincidencia muy aceptable para los valores de los parámetros clave. Conociendo de antemano el impacto de los ajustes de los parámetros de tipo de célula, debería ser posible refinar aún más el tipo de célula MT02 reduciendo levemente el diámetro máximo para una mejor coincidencia con los valores del Vi–CELL XR.


Conclusiones

Al aprovechar el cargador de placas en el Vi–CELL BLU, es posible ejecutar un solo experimento para obtener muy rápidamente información valiosa sobre cómo hacer coincidir los valores del Vi–CELL XR. La placa permite un diseño experimental complejo y la recopilación de suficientes datos de muestra para tener confianza en los números generados.

 

 

 

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