Requisitos de la sala limpia para las pruebas de partículas en líquido

Las partículas contaminantes en los tratamientos con medicamentos inyectables o de infusión pueden ser microbiológicas y dar lugar a una infección, una reacción alérgica o, en casos extremos, a un choque anafiláctico. Con la seguridad del paciente en juego, las directrices de las Buenas Prácticas de Fabricación (GMP) exigen que las inyecciones e infusiones se elaboren en un entorno controlado para contener cualquier riesgo de contaminación del producto debido a las partículas en el aire.

Este mismo riesgo existe cuando se realizan pruebas de niveles de partículas en el producto final. El capítulo <787> de la USP recomienda que la prueba de partículas en líquido se realice en un entorno controlado para reducir el riesgo de contaminación durante la prueba de la muestra, y ayudar a prevenir "falsos positivos" que pudiesen ocurrir si se introdujesen partículas en un producto farmacéutico durante la fase de prueba. La protección de la muestra durante las pruebas es fundamental para evitar un costoso evento de contaminación que pudiese impedir la liberación de todo el lote. Más sobre las pruebas de partículas por oscurecimiento de la luz según USP <787>.

Clasificación de la materia particulada

En general, cualquier material semisólido a sólido se puede contar y considerar peligroso tras la identificación. Como ejemplos cabe citar: aire, líquido, gel, sólido singular, agregado, aglomerado, fármaco sólido, sal, polimorfo, lubricante y plastificante.

Los tipos comunes de materia particulada son extrínsecas, intrínsecas e inherentes.

El capítulo <787> de la USP permite la presencia de partículas de proteínas insolubles como parte intrínseca de los tratamientos basados en proteínas, etiquetándolas como partículas inherentes. La norma establece una clara distinción entre las partículas de proteína inherentes y las partículas "contaminantes" que no deberían estar presentes. Para garantizar que el producto final cumpla con los límites de partículas permitidos, es esencial comprender la identificación, el origen y la caracterización de la materia particulada.

USP <787> requiere que los fabricantes hagan pruebas de partículas a ≥10 micras y ≥25 micras. Las partículas de proteína inherentes se encuentran normalmente en el intervalo de tamaño submicrónico o nanométrico y, por lo tanto, las pruebas no las detectan. Sin embargo, las proteínas tienden a "plegarse" o agregarse con el tiempo formando partículas lo suficientemente grandes como para impactar en un resultado de aprobado/rechazado. La agregación de proteínas es indeseable dado que hace que la parte terapéutica de la proteína se ocluya, lo que la hace menos efectiva para los pacientes.

Preparación de la muestra para formulaciones basadas en proteínas

  • Aplique un ligero vacío en el material para eliminar el gas retenido
    • Evite la sonicación al trabajar con proteínas
  • No se recomienda invertir para mezclar el producto en ningún momento
    • Vuelva a mezclar delicadamente; mueva lentamente el recipiente en remolino a mano
  • La dilución se debe hacer con cuidado para evitar la disociación y/o la agregación
    • La reconstitución se debe realizar con la cantidad adecuada del disolvente específico.
    • Se debería probar el disolvente mismo para garantizar que no sea una fuente de partículas. NOTA: No se permite restar el recuento de diluyente del recuento total

USP <787> y la preparación del sistema de oscurecimiento de la luz

Cuando trabaje con un contador de oscurecimiento de la luz, procese un par de soluciones de prueba para verificar que el sistema funcione correctamente. Tenga en cuenta la posibilidad de realizar estos controles de estado en los cambios de turno o de operador u otros intervalos definidos.

  • Prueba en blanco 1 (agua “libre de partículas”)
  • Idoneidad del sistema para la prueba de materiales
    • Estándar de referencia de recuento de partículas o PCRS USP (material de cantidad conocida al tamaño específico)
    • o alternativa adecuada

Volúmenes de prueba y muestreo

La USP <787> también se refiere al volumen de las inyecciones, que son típicamente más pequeñas que las de los productos farmacéuticos de moléculas pequeñas. El requisito de volumen de muestra (25,0 ml) por lote de la USP <788> supone una exigencia de prueba difícil y costosa para las terapias basadas en proteínas. Con la <787>, los fabricantes tienen permitido hacer pruebas con volúmenes de muestra de 0,2 ml y 5,0 ml siempre que se proporcione un conjunto de evidencias y que la muestra analizada sea una buena representación estadística del lote fabricado.

Contenido total de partículas: Limitado a 6000 partículas

Umbrales de tamaño de partícula: Límites similares a USP <787>/<788> de ≥10 μm y 600 partículas ≥25 μm (todos los formatos de dosis)

La USP <787> recomienda que las poblaciones por debajo de 10 μm se monitoricen de forma rutinaria para caracterizar la estabilidad de la formulación final del fármaco.

La USP <787> anima a los fabricantes de tratamientos basados en proteínas a realizar pruebas de partículas con un contador de partículas de oscurecimiento de luz y técnicas ortogonales2 para revelar mejor la estructura y estabilidad de lo biológico en el tiempo. Aunque es la técnica primaria, no todos los preparados se pueden examinar en busca de partículas subvisibles mediante el oscurecimiento de la luz.

2Se puede emplear un método ortogonal para evaluar/validar el método primario. Ejemplo: Se pueden utilizar dos métodos para investigar el agregado proteínico - Método 1: cromatógrafo de exclusión de tamaño/ técnica ortogonal - Método 2: ultracentrifugado analítico.

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