Automatización de los ensayos Bradford

Nota de aplicación de automatización de ensayos Bradford Biomek i5, Figura 1Tipo de contenido: Nota de aplicación

El valor de automatizar un flujo de trabajo complejo o largo es evidente para el científico que se ve liberado de tener que hacer el trabajo. Sin embargo, la automatización de protocolos sencillos también proporciona valor si el método automatizado es sencillo de crear o si el protocolo se ejecuta con elevada frecuencia. Por ejemplo, demostramos la facilidad con que se automatizó un ensayo Bradford en el instrumento Biomek i5 (Figura 1).

Figura 1. Estación de trabajo de sobremesa automatizada Biomek i5. 

Nota de aplicación de automatización Método y distribución de cubierta de ensayos Bradford Biomek i5, Figura 2

Figura 2. Distribución de cubierta (A) y método (B) para el ensayo de proteínas Bradford. El paso resaltado (derecha) muestra la adición de reactivo Bradford a la placa de ensayo.

La Figura 2 muestra la distribución de cubierta y el método de Biomek utilizado para ejecutar el ensayo Bradford (ensayo de proteínas Bio-Rad). Para simplificar la creación de métodos, utilizamos material de laboratorio (placas, depósitos) predefinido en el software. El método solo requiere 6 pasos para:

  1. Añadir diluyente para una curva patrón
  2. Diluir en serie un estándar BSA
  3. Transferir reactivo Bradford
  4. Transferir curva patrón en pocillos por triplicado
  5. Transferir muestras, y
  6. Agitación orbital para mezclar
mg/ml BSA
Promedio Absorbancia CV
0,5 0,766 1,0 %
0,25 0,542 0,7 %
0,125 0,395 1,5 %
0,063 0,328 1,0 %
0,031 0,290 1,0 %
0 0,246 0,2 %

Se utilizaron técnicas de pipeteo estándar con una única optimización para garantizar que no se introdujeron burbujas en los pocillos de ensayo. Tras una incubación de 30 minutos, se leyó la absorbancia a 595 nm en la plataforma de modo múltiple SpectrAmax® i3x.

La tabla 1 muestra los CV bajos de los estándares, lo que indica una preparación de muestras consistente a través de pocillos triplicados. La Figura 3 muestra la linealidad (R2 = 0,9952) de la curva patrón que ilustra la efectividad de la dilución en serie. Si se procesaron 72 muestras junto con la curva patrón, todo el proceso se pudo completar en aproximadamente 12 minutos.

Tabla 1. Variabilidad y absorbancia media por triplicado para los estándares de BSA.

 

Nota de aplicación de automatización Curva patrón del ensayo Bradford, Figura 3

Figura 3. Curva patrón del ensayo Bradford. La linealidad (R2 = 0,9952) indica una dilución en serie eficaz de los estándares de BSA.

Aunque las funciones como la plataforma de alta densidad y la flexibilidad para integrar dispositivos hacen que el instrumento Biomek i5 sea capaz de automatizar una cantidad más elevada de procesos o flujos de trabajo de mayor complejidad, los ensayos sencillos también pueden beneficiarse igualmente de la consistencia y reproducibilidad de la automatización. La facilidad de uso de las estaciones de trabajo automatizadas Biomek serie i reduce la barrera para automatizar todos los flujos de trabajo y el aumento resultante en el uso del instrumento reduce el tiempo de amortización de las inversiones en automatización.

 

*Datos obtenidos durante el desarrollo
Solo para uso en investigación. No se debe utilizar en procedimientos con fines diagnósticos.

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